GB 5009.35-2023食品中合成著色劑的測定標準將于2024-03-06起實施，本次標準修訂在現(xiàn)有檢測方法的基礎上，擴充了能夠檢測的食品基質(zhì)類型和著色劑種類，覆蓋了GB 2760-2014中規(guī)定的11種合成著色劑（分別為檸檬黃、新紅、菜紅、藍、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、唾咻黃、赤蘚紅和酸性紅），以及允許添加的所有基質(zhì)大類中的25種典型基質(zhì)。同時前處理方法也由聚酰胺粉變更為WAX混合型弱陰離子交換反相吸附或等效固相萃取柱。

本實驗參考標準《GB 5009.35-2023 食品中合成著色劑的測定》，使用EZsep? WAX固相萃取柱凈化樣品，再通過E.T.氮吹濃縮儀濃縮，高效液相色譜進行檢測，建立了飲料中合成著色劑的分析方法。

關鍵詞：

飲料；著色劑；EZsep? WAX

1.1 儀器與試劑

LC-20AD液相色譜儀，島津企業(yè)管理（中***）有限公司；

MPREP-SPE08手動固相萃取裝置，貨號：PZ0008，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

EZsep? WAX固相萃取柱（150mg/6mL），貨號：PZ12103，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學儀器廠；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中***）有限公司；

甲酸、氨水、無水乙醇、乙酸銨等化學品均為分析純或以上，購自***藥集團化學試劑有限公司。

水中11種色素混標，100μg/mL，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。

1.2 工作液配制

取色素混合標準溶液1mL，用水稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的色素混標中間液。

移取10μg/mL的色素混標中間液0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mL，分別用水稀釋至1.0mL容量瓶中，得到濃度依次為0.2、0.5、1、2、5、10μg/mL的標準系列工作液。

1.3 實驗部分

準確稱取試樣2.0g，置于50mL具塞離心管中，先加入25mL乙醇氨水溶液，渦旋1min，10000r/min離心5min，取上清液置于50mL容量瓶中，用乙醇氨水溶液定容至刻度即得提取液。準確吸取提取液10mL，50℃氮氣濃縮至3mL左右，分3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，作為待凈化液，待凈化。

將EZsep? WAX固相萃取柱（150mg/6mL，貨號：PZ12103）依次用6mL甲醇、6mL水活化后，加入待凈化液，上樣結束后再依次用6mL2%甲酸水溶液、6mL甲醇淋洗固相萃取柱，抽干，以6mL2%氨化甲醇溶液洗脫并收集洗脫液，經(jīng)E.T.氮吹濃縮儀在50℃下氮氣濃縮至近干，再加0.2mL甲醇，用0.02mol/L乙酸銨稀釋至2.0mL，渦旋1min，PTFE微孔濾膜過濾，高效液相色譜測定。

1.4 LC分析

色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）

流動相：A：0.02mol/L乙酸銨溶液 B：甲醇

流速：1.0mL/min

檢測波長：415nm、520nm、610nm

進樣量：10μL

表1流動相梯度洗脫表

表2 加標回收率結果

圖1 1.0μg/mL混標色譜圖

圖2 樣品加標色譜圖

圖3 空白樣品色譜圖

本實驗使用EZsep? WAX固相萃取柱（150mg/6mL，貨號：PZ12103，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司）對飲料中合成著色劑進行凈化后測定，該方法的加標回收率范圍在79.3%~96.4%之間，RSD在1.1%~3.3%之間。準確性和精密度均滿足GB 5009.35-2023要求，實驗方法穩(wěn)定、可靠。