磺胺類藥物是應(yīng)用***早的***類人工合成抗菌藥物，具有抗菌譜廣、療效強、方便安全等優(yōu)點，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用非常廣泛，但是磺胺類藥物可通過食物鏈在人體內(nèi)蓄積，導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，危害人體健康，引起排尿和造血紊亂等不良后果。為了消費者健康，嚴(yán)格監(jiān)控動物源性食品中的藥物殘留至關(guān)重要，為此需要可靠的分析方法來監(jiān)測這些藥物殘留。

本實驗參考標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)業(yè)部958號公告-12-2007 水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留量的測定 液相色譜-紫外檢測法》，使用EZsep?HLB固相萃取柱凈化樣品，高效液相色譜進(jìn)行檢測，建立了水產(chǎn)中磺胺類藥物殘留量的分析方法。

關(guān)鍵詞

水產(chǎn)；磺胺類；獸藥殘留；EZsep?HLB

1.1 儀器與試劑

MPREP-SPE08固相萃取裝置，貨號：PZ0008，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

EZsep?HLB固相萃取柱（150mg/6mL），貨號：PZ12603，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

MVP全自動高通量真空平行濃縮儀，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

LC-20AD液相色譜儀，島津企業(yè)管理（中***）有限公司；

冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中***）有限公司；

乙腈（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中***）有限公司；

正己烷（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中***）有限公司；

乙酸乙酯（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中***）有限公司；

乙酸（分析純），購自***藥集團化學(xué)試劑有限公司；

無水硫酸鈉（分析純），購自***藥集團化學(xué)試劑有限公司，經(jīng)450℃灼燒4h，置于干燥器內(nèi)備用；

甲醇中14種磺胺類藥物混標(biāo)，100μg/mL，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。

1.2 工作液配制

取甲醇中14種磺胺類藥物混標(biāo)溶液1.0mL，用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的磺胺類藥物混標(biāo)中間液。

分別移取10μg/mL的磺胺類藥物混標(biāo)中間液0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mL用流動相稀釋至10mL容量瓶中，得到濃度分別為0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 實驗部分

準(zhǔn)確稱取魚肉試樣5.0g，置于50mL具塞離心管中，先加入25mL乙酸乙酯，均質(zhì)1min，然后加入5g無水硫酸鈉，旋渦混勻1min，超聲提取1min，8000r/min冷凍離心10min，將乙酸乙酯層移到200mL濃縮杯中。再向原離心管中加人25mL乙酸乙酯，旋渦混勻1min，8000r/min冷凍離心10min，將乙酸乙酯層合并于200mL濃縮杯中，于30℃水浴中減壓濃縮至近干。先用1mL甲醇溶解上述殘渣，再加入2mL1%乙酸溶液，渦旋混勻，超聲1min，轉(zhuǎn)移到新的50mL離心管中，再向濃縮杯中加人1mL甲醇和2mL1%乙酸溶液，渦旋混勻，超聲1min，轉(zhuǎn)移合并于50mL離心管中。向離心管中加人8mL正已烷，渦旋混勻，8000r/min冷凍離心5min，棄上層正已烷層，再加入8mL正已烷重復(fù)操作***次，下層加水10mL稀釋，混勻，待凈化。

EZsep?HLB固相萃取柱（150mg/6mL，貨號：PZ12603）依次用5mL甲醇、5mL水活化后，取待凈化液上樣，上樣結(jié)束后依次用3mL水、2mL5%甲醇水溶液淋洗萃取柱，再用10mL甲醇洗脫萃取柱，收集洗脫液于30℃氮吹濃縮至近干，用流動相定容至1mL，混勻，用PTFE微孔濾膜過濾，高效液相色譜測定。

1.4 LC分析

色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）

柱溫：40℃

流動相：A：2%乙酸溶液 B：乙腈 C:甲醇

流速：0.6mL/min

檢測波長：270nm

進(jìn)樣量：50μL

表1 流動相梯度表

表2 加標(biāo)回收率結(jié)果

圖1 1.0μg/mL混標(biāo)色譜圖

圖2 空白樣品色譜圖

圖3 樣品加標(biāo)色譜圖

本實驗使用EZsep?HLB固相萃取柱（150mg/6mL，貨號：PZ12603，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司）對魚肉中磺胺類藥物凈化后進(jìn)行測定，該方法的加標(biāo)回收率在76.1%~92.0%之間，RSD在1.0%~4.6%之間。準(zhǔn)確性和精密度均滿足農(nóng)業(yè)部958號公告-12-2007要求，實驗方法穩(wěn)定、可靠。