紫外交聯儀在測定麥角硫因抑制紫外輻射誘發(fā)自由基性能方面的應用
麥角硫因（ergothioneine，EGT）作為***種天然手性氨基酸衍生物，存在硫醇和硫酮兩種互變異構形式。研究表明EGT可抑制脂質過氧化損傷，清除羥自由基（·OH）、超氧化物和單線態(tài)氧（1O2）等多種活性氧（ROS）物質，是優(yōu)異的皮膚光敏保護劑。通過紫外線照射光敏劑羅丹明B（RhB）溶液誘發(fā)包括1O2在內的自由基體系（簡稱UV-RhB體系），模擬紫外線照射人體皮膚產生ROS的情況，研究EGT在此體系下的抗氧化性能及其穩(wěn)定性，以期為EGT應用于抗衰護膚品的開發(fā)提供理論依據。
實驗方法 1. UV-RhB體系中EGT和VC抗氧化性能的測定 以pH 7.2的磷酸鹽緩沖液（PBS，取2.2 g Na2HPO4，0.3 g NaH2PO4和8.5 g NaCl，加水溶解至1000 ml）為溶劑，分別配制0.001 %羅丹明B溶液（RhB）、0~1.00 mg/ml的EGT溶液及維生素C（VC）溶液。按表1配制測定溶液體系I、II，置紫外光（波長254 nm，光強度5 mW/cm2）下照射。分別于0，1 h時，采用酶標儀，測定555 nm波長處吸收值（A0和A1），每個樣品平行3份，計算0 h和1 h吸光度變化量的平均值（ΔA），以ΔA空白為基線，按下式計算體系中活性物質的抗氧化性能（F）。F（%）= （ΔA空白-ΔA樣品）/ ΔA空白×100 ΔA空白式中，ΔA空白：空白對照溶液的吸收值的變化量（A0空白-A1空白）；ΔA樣品：樣品溶液的吸收值的變化量（A0樣品-A1樣品）。 2.離子強度對EGT抗氧化性能的影響 按表1配制測定溶液體系III，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，以EGT濃度為0的體系作為空白對照，分別加入NaCl濃度分別為0 %，0.40 %，0.85 %，1.30 %，1.75 %的PBS。按2.1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同離子強度體系的ΔA和F值。 按表1配制測定溶液體系IV，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，以EGT濃度為0的體系作為空白對照，用0.1 mol/L HCl溶液和0.1 mol/L NaOH溶液分別調節(jié)PBS緩沖液pH值為3.0，5.0，7.2，9.0，11.0。按1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同pH體系的ΔA和F值。 4.還原劑對EGT抗氧化性能的影響 按表1配制測定溶液體系V，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，并以EGT濃度為0的體系作為空白對照，Na2SO3溶液以PBS緩沖液為溶劑，濃度分別為0 %，0.02 %，0.05 %，0.10 %，0.25 %，0.50 %。按1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同還原劑濃度體系的ΔA和F值。 5.金屬離子對EGT抗氧化性能的影響 按表1配制測定溶液體系VI，其中溶劑為生理鹽水，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，并以EGT濃度為0的體系作為空白對照。分別加入0.05 mol/L的K+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Fe3+生理鹽水溶液。按1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同金屬離子體系的ΔA和F值。 6.EDTA對EGT抗氧化性能的影響 按表1配制測定溶液體系VII，其中溶劑為生理鹽水，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，并以EGT濃度為0的體系作為空白對照。分別加入0.10 mol/L的Fe3+溶液和0 %，0.02 %，0.04 %，0.10 %，0.20 %的EDTA溶液。按1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同EDTA濃度體系的ΔA和F值。
實驗結果 不同濃度EGT和VC的抗氧化性能見圖1。由圖1可見，0~1 mg/ml范圍內，EGT和VC的F值隨濃度的升高而增大，且相同濃度下EGT的F值***直高于VC，表明EGT和VC抗氧化作用具有較好的量效關系，同時在此體系下EGT的抗氧化性能優(yōu)于VC。 離子強度對EGT抗氧化性能的影響見圖2。由圖2可見，NaCl濃度在0 %~0.85 %范圍內，EGT的F值較為穩(wěn)定，當NaCl濃度高于0.85 %時，F值急劇下降，表明此時EGT抗氧化性能受到體系內高離子強度的抑制而顯著降低。 pH值對EGT抗氧化性能的影響見圖3。由圖3可見，在pH 5~9范圍內EGT的F值變化相對較小，表明EGT抗氧化活性在pH 5~9范圍內較為穩(wěn)定。 還原劑亞硫酸鈉對EGT抗氧化性能的影響見圖4。由圖4可見，隨著亞硫酸鈉濃度的增大，F值呈下降趨勢，表明在此體系中加入亞硫酸鈉可抑制EGT的抗氧化活性。亞硫酸鈉濃度大于0.1 %時，F值趨于穩(wěn)定，表明其抑制作用趨于平緩。
